AVT-高端辅料提供商(PEG磷脂|91狠狠干|中链甘油三酯|91狠狠爱|MCT|91狠狠|合成磷脂|药用磷脂)-艾伟拓(上海)医药科技有限公司

DLin-DMA的衍生發(fā)展史

文章來源:發(fā)布時間:2023-09-15瀏覽次數(shù):

DLin系列


本實(shí)驗(yàn)中,研究人員采用了一種合理的方法來設(shè)計(jì)陽離子脂質(zhì),并制備用于遞送小干擾RNA(siRNA)的配方。以穩(wěn)定核酸脂質(zhì)顆粒(SNALP)的關(guān)鍵脂質(zhì)成分1,2-二甲醇氧基-3-二甲基氨基丙烷(DLinDMA)為例,研究人員利用所提出的可電離陽離子脂質(zhì)的體內(nèi)作用機(jī)制來指導(dǎo)設(shè)計(jì)具有優(yōu)異遞送能力的基于DLinDMA結(jié)構(gòu)拓展的脂質(zhì)。通過篩選后,對性能**的脂質(zhì)(DLin-KC2-DMA),進(jìn)行了SNALP配制和表征,并在嚙齒類動物和非人靈長類動物中分別在低至0.01 mg/kg和0.1 mg/kg的siRNA劑量下,證明具有體內(nèi)活性。研究發(fā)現(xiàn),DLin-KC2-DMA介導(dǎo)的基因沉默比以前關(guān)于體內(nèi)內(nèi)源性肝臟基因沉默的報(bào)道有了實(shí)質(zhì)性的改進(jìn)。


表1.1 基于DLin-DMA的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)


圖1.1. 新型陽離子脂質(zhì)的體內(nèi)評價(jià)


(a). DLinDAP的沉默活性(▼), DLinDMA(▲), DLin-K-DMA(■) 和DLin KC2-DMA(●)在小鼠FVII模型中的篩選。所有LNP siRNA系統(tǒng)都是使用預(yù)成型囊泡(PFV)方法制備的,由可電離的陽離子脂質(zhì)、DSPC、膽固醇和PEG脂質(zhì)(40:10:40:10mol/mol)組成,F(xiàn)VII siRNA/總脂質(zhì)的比例約為0.05(wt/wt)。

(b). 頭群擴(kuò)展對DLin-K-DMA活性的影響。DLin-K-DMA(■)在DMA頭基和縮酮環(huán)連接體之間添加了額外的亞甲基,以生成DLin-KC2-DMA(●),DLin-KC3-DMA(▲)和DLin-KC4-DMA(▼)在小鼠因子VII模型中評估每種脂質(zhì)的制劑活性。


表1.2 含有新型脂質(zhì)的LNPs的生物物理參數(shù)和體內(nèi)活性



鑒于正電荷在指導(dǎo)脂質(zhì)設(shè)計(jì)的作用機(jī)制假說中的重要性,在DLin-K-DMA作為新的基準(zhǔn)脂質(zhì)的綜述中研究了胺基頭基結(jié)構(gòu)變化的影響。進(jìn)行了一系列頭基修飾、表征和測試,以探索大小、酸離解常數(shù)和可電離基團(tuán)數(shù)量的影響(補(bǔ)充合成2和補(bǔ)充表2)。所測試的哌嗪基、嗎啉基、三甲基氨基或雙二甲基氨基修飾并不優(yōu)于DLin-K-DMA的基準(zhǔn)二甲基氨基頭基。作為附加參數(shù),通過引入額外的亞甲基來改變二甲基氨基和二氧戊環(huán)連接體之間的距離。該距離可以影響胺頭基的pKa以及電荷呈現(xiàn)相對于脂質(zhì)雙層界面的距離和柔性。相對于DLin-K-DMA,將單個額外的亞甲基插入頭部基團(tuán)(DLin-KC2-DMA)產(chǎn)生效力的**增加。在FVII模型中,這種脂質(zhì)的ED50約為0.1 mg/kg,使其效力比DLin-K-DMA高4倍,比DLinDMA基準(zhǔn)高10倍。然而,具有額外亞甲基的系鏈的進(jìn)一步延伸**降低了活性,DLin-KC3-DMA的ED50約為0.6 mg/kg,DLin-KC4-DMA的ED50>3 mg/kg。


圖1.2. 基于DLin-K-DMA,延長頭部基團(tuán)碳鏈長度對粒徑及ED50的影響


圖1.3. KC2-SNALP對嚙齒類動物和非人類靈長類動物的療效


(a) 相對于在小鼠中測試的初始篩選制劑,KC2-SNALP的療效得到改善。KC2-SNALP的體內(nèi)療效(○) 與小鼠因子VII模型中未優(yōu)化的DLin-KC2-DMA篩選(即PFV)制劑(●)的結(jié)果進(jìn)行比較。數(shù)據(jù)點(diǎn)以PBS對照動物的百分比表示,**組平均值(n=5)±s.d.(b)KC2-SNALP在非人靈長類動物中的療效。食蟹猴(每組n=3)接受0.03、0.1、0.3或1 mg/kg siTTR,或1 mg/kg在KC2-SNALP或PBS中配制的siApoB的總劑量,通過頭靜脈靜脈輸注15分鐘(5 ml/kg)。給藥后48小時對動物實(shí)施安樂死。在肝臟樣品中測定TTR mRNA水平相對于***DH mRNA水平。數(shù)據(jù)點(diǎn)**組平均值±s.d.*,P<0.05;**,P<0.005。

表1.3 含有KC2的SNALP的體內(nèi)活性


總結(jié),研究人員將一種合理的方法應(yīng)用于新型陽離子脂質(zhì)的設(shè)計(jì),這些脂質(zhì)被篩選用于基于LNP的siRNA遞送系統(tǒng)。脂質(zhì)結(jié)構(gòu)分為三個主要功能元件:烷基鏈、連接基和頭基。以DLinDMA為起點(diǎn),通過保持其他兩個元素不變,以系統(tǒng)的方式研究了這些元素中每一個的影響。首先,建立了烷基鏈,然后改變了連接體,**,探索了不同的頭基結(jié)構(gòu)。使用這種方法,描述了可離子化陽離子脂質(zhì)的重要結(jié)構(gòu)-活性考慮因素,并鑒定了相對于DLinDMA基準(zhǔn)具有改進(jìn)活性的脂質(zhì)。性能**的脂質(zhì)(DLin-KC2-DMA)的SNALP制劑在嚙齒類和非人類靈長類動物中都具有良好的耐受性,并且在嚙齒類動物中在低至0.01mg/kg的siRNA劑量下表現(xiàn)出體內(nèi)活性,并且在非人類靈長目動物中表現(xiàn)出****基因(TTR)的沉默。盡管目前的工作范圍**于體內(nèi)肝臟遞送,但與之前關(guān)于LNP siRNA介導(dǎo)的非人靈長類動物沉默的報(bào)道相比,這項(xiàng)工作中實(shí)現(xiàn)的TTR沉默(ED50~0.3 mg/kg)**了活性的**提高。


試驗(yàn)2

MC3**限度地提高siRNA脂質(zhì)納米顆粒在體內(nèi)用于肝臟基因沉默的效力[2]

pKa的考察


圖2.1.TNS熒光法測定pKa


如圖2所示,四種可電離陽離子脂質(zhì)的pKa的測定實(shí)例。pKa的取值,定義為在一半**熒光強(qiáng)度下的pH值。(A). 14,pKa=4.17;(B). 52,pKa=5.73;(C). 19,pKa=6.95;(D). 48,pKa=8.12。


圖2.2. 小鼠體內(nèi)肝臟基因沉默活性與pKa的關(guān)系圖


將56個可電離陽離子脂質(zhì)配制成LNP,并進(jìn)行ED50分析,根據(jù)它們的pKa,繪制得到圖4。有15種脂質(zhì),沒有達(dá)到ED50劑量。剩余的脂質(zhì),通過**擬合曲線突出顯示了**活性的化合物,其表現(xiàn)出在6.2和6.5之間的**pKa。


表2.1. 56種可電離陽離子脂質(zhì)的設(shè)計(jì)及其ED50,pKa值考察



圖2.3. 小鼠肝臟基因沉默活性圖


pKa在4-8.5之間,計(jì)算質(zhì)子化/未質(zhì)子化可電離陽離子脂質(zhì)的電離程度(%摩爾分?jǐn)?shù))。每個FVII ED50數(shù)據(jù)點(diǎn)(藍(lán)色)來源于四劑量反應(yīng)(每個劑量水平n=4只小鼠)。假設(shè)pH為7.4,在血液中攜帶正電荷的陽離子脂質(zhì)顯示為紅色,而在pH為5.5的酸性內(nèi)涵體中不帶電的陽離子脂質(zhì)的顯示為綠色


圖2.4.支持pKa值作為決定可電離陽離子脂質(zhì),體內(nèi)肝臟基因沉默活性的主導(dǎo)因素。


可電離陽離子脂質(zhì)15、16和17的混合物使所得LNP的平均表面pKa值在5.64和6.93之間遞增移位。括號中的數(shù)字表示混合物中陽離子脂質(zhì)的摩爾比(氨基脂質(zhì)組分)。



圖2.5.可電離陽離子脂質(zhì)(16,DLin-MC3-DMA)的siRNA-LNP在小鼠和非人類靈長類動物中的功效。


在本研究中使用了含有50摩爾%的16(DLin-MC3-DMA)的經(jīng)過優(yōu)化后的制劑組合。相對于具有約0.005 mg.kg-1的中值有效siRNA劑量(ED50)的生理鹽水對照組,小鼠血清中的殘余FVII活性;柱狀圖**平均值(n=5)給予食蟹猴0.03、0.1和0.3mg.kg-1劑量的靶向TTR基因的siRNA。線型圖則表示平均值(n=3),以TTR mRNA表示,相對于肝臟樣本中測定的***DH mRNA水平,ED50估計(jì)為<0.03 mg.kg-1。


艾偉拓現(xiàn)有DLin-KC2-DMA和DLin-MC3-DMA現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎廣大客戶咨詢采購。



Reference

[1]. Semple SC, Akinc A, Chen J, Sandhu AP, Mui BL, Cho CK, Sah DW, Stebbing D, Crosley EJ, Yaworski E, Hafez IM, Dorkin JR, Qin J, Lam K, Rajeev KG, Wong KF, Jeffs LB, Nechev L, Eisenhardt ML, Jayaraman M, Kazem M, Maier MA, Srinivasulu M, Weinstein MJ, Chen Q, Alvarez R, Barros SA, De S, Klimuk SK, Borland T, Kosovrasti V, Cantley WL, Tam YK, Manoharan M, Ciufolini MA, Tracy MA, de Fougerolles A, MacLachlan I, Cullis PR, Madden TD, Hope MJ. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery. Nat Biotechnol. 2010 Feb;28(2):172-6. doi: 10.1038/nbt.1602. Epub 2010 Jan 17. PMID: 20081866.

[2]. Jayaraman M, Ansell SM, Mui BL, Tam YK, Chen J, Du X, Butler D, Eltepu L, Matsuda S, Narayanannair JK, Rajeev KG, Hafez IM, Akinc A, Maier MA, Tracy MA, Cullis PR, Madden TD, Manoharan M, Hope MJ. Maximizing the potency of siRNA lipid nanoparticles for hepatic gene silencing in vivo. Angew Chem Int Ed Engl. 2012 Aug 20;51(34):8529-33. doi: 10.1002/anie.201203263. Epub 2012 Jul 10. PMID: 22782619; PMCID: PMC3470698.





主站蜘蛛池模板: 久久黄色一级视频_视频一区精品自拍_理论片免费ā片在线观看_亚洲色视频在线播放网站_香港经典a毛片免费观看_亚州三级久久电影 | 破碎机设备-锤式颚式反击式圆锥移动冲击式破碎机厂家-成都大宏立机器公司 | 木材粉碎机,树枝粉碎机,木材破碎机厂家| 微孔板恒温振荡器-超声波探伤试块-微孔板迷你离心机-南京互川电子有限公司 | 图表秀——免费在线图表制作工具,数据可视化工具 | 宿迁代账公司,专业会计查账,代理工商注册,商标注册,专利申请,公司注册哪家好-中方会计事务所 | 企业宣传片制作公司-广告宣传片拍摄-专题片,tvc广告制作-拍摄微电影影视公司-艺虎文化 | 上海搬运公司_上海工厂设备搬迁_大型设备吊装搬运_设备安装公司-桂星装卸搬运 | 聊城钢管厂,无缝钢管厂家-山东旺耀金属制品有限公司 | 秦皇岛图成玻璃_横切机,琴键落板,堆垛机械手,玻璃钢化设备,掰边机,铺纸机,水平堆垛机+超大板堆垛机,纵掰纵分,下片机,冷端优化切割 | 南京展览公司|南京会展制作|南京展台搭建|南京展厅设计|企业展览馆 | 莱湾科技-智能会议室|多功能|多媒体|音视频|无纸化|远程视频会议室运维 | 水表_智能电表_抄表软件_ic卡水控机_电磁水表厂家-深圳市华熙仪数码科技有限公司 | 消防排烟风机|防火阀|斜流风机|江苏恒恒暖通设备有限公司 | 聚丙烯酰胺,聚合氯化铝,重金属捕捉剂,污泥调理剂,活性氧化铝,生石灰,反渗透阻垢剂,工业葡萄糖,硫酸铝,果壳活性炭,柱状活性炭,蜂窝活性炭,石英砂,锰砂-北京雁归来环保科技有限公司-以真诚为立足之本,以质量为生存之本,愿与海内外同仁共创双赢。雁归来人一路走来,气贯长虹,勇锐盖过怯弱,进取压倒苟安!我们紧扣时代脉搏,专注水处理、继往开来! | 自走式缠绕机_上海德目包装设备厂家_在线式缠绕机_缠绕膜打包机 自装卸(挂桶)车|钩臂垃圾车|压缩垃圾车|密封自卸车|环卫垃圾车|餐厨车泔水车湖北程力专用车厂家 | 雨量计,翻斗雨量计,声波雨量计i,时差法流量计,时差法明渠流量计 - 徐州伟思水务科技有限公司 | 滤布_PP滤芯_过滤芯_线绕滤芯_碳纤维滤芯 - 东莞市三比过滤器材有限公司 | 拼装式电磁屏蔽室厂家,屏蔽机柜生产厂家,电波暗室制造商,屏蔽配件-常州麦思恩屏蔽机柜生产厂家 | 上海机械加工-机械加工-精密机械加工-上海欧野精工机械有限公司 上海慧泰仪器制造有限公司_一体型马弗炉-可控真空干燥箱-强光稳定性试验箱 | 上海商标注册,上海注册商标,上海商标代理,国际商标注册,版权登记-上海律点知识产权代理有限公司 上海山田机械有限公司 | 消防排烟风机|3C排烟风机|正压送风机|高温排烟风机|柜式排烟风机-山东锦松环境设备有限公司 | 植绒布工厂,植绒布现货批发-深圳市金峰盛植绒制品有限公司 | 柯赛德斯-加美润滑油-专业做汽车工业润滑油品牌加盟代理 | 新2025澳门天天开好彩生肖对照表,2025新澳精准正版免费,2025新澳今晚开奖资料大全,新澳门四肖期期准免费,新澳门今晚9点30分开奖结果 | 康拓威技术(深圳)有限公司|Theia镜头代理商|安讯士AXIS摄像机|安讯士监控系统|博世BOSCH监控|博世会议系统|索尼SONY监控|松下PANASONIC监控|三星韩华SAMSUNG监控|霍尼韦尔Honeywell|海康|大华|华为监控|Theia无畸变镜头|AXIS监控|安讯视摄像机 | 南通市科脉电子科技有限公司 | 江苏广分检测技术有限公司、电力安全工具检测、苏州绝缘工具检测、昆山电力安全工具检测-广分检测技术(苏州)有限公司 | 泡沫混凝土垫层填充厂家,发泡混凝土垫层填充,轻质混凝土垫层填充厂家,深圳市鸿奥建材发展有限公司 | 山东岱新起重机械有限公司,单梁桥式起重机,双梁桥式起重机,通用式门式起重机,欧式起重机系列 | 上海舜华新能源系统有限公司_官网 | 门禁控制器-自动道闸-停车场系统-车位引导系统-车牌识别系统-楼宇对讲-可视门铃-门禁一卡通-河北京鹏电子科技有限公司 | 威海牙科,威海种植牙,威海人工种植牙-威海经济开发区姚晓艺口腔诊所 | 苏州市相城区望亭镇叶凡工艺服饰绣品厂 | 廊坊微信营销,廊坊小程序开发,廊坊APP开发(安卓_苹果ios开发),微信朋友圈广告,百度推广,廊坊网络公司品牌服务商-河北盛秋网络科技有限公司 | 亚克力游泳池_透明/空中/无边泳池_别墅亚克力泳池设计生产厂家_瑞地格乐-深圳他拍档 | 呼吸家官网|肺功能检测仪生产厂家|国产肺功能仪知名品牌|肺功能检测仪|肺功能测试仪|婴幼儿肺功能仪|弥散残气肺功能仪|肺功能测试系统|广州红象医疗科技有限公司|便携式肺功能仪|大肺功能仪|呼吸康复一体机|儿童肺功能仪|肺活量计|医用简易肺功能仪|呼吸康复系统|肺功能仪|弥散肺功能仪(大肺)|便携式肺功能检测仪|肺康复|呼吸肌力测定肺功能仪|肺功能测定仪|呼吸神经肌肉刺激仪|便携式肺功能 | 九江赛璐珞实业有限公司-赛璐珞板,赛璐璐板材,PVC装饰膜,PVC片材,醋酸纤维胶板_多彩装饰材料生产厂家 | 济南晨阳科技有限公司-锅巴生产设备-夹心米果设备-膨化食品机械 集装箱零配件_不锈钢丝绳厂家_镀锌铁链条_合页非标件定制_上海英鑫多实业有限公司 | 室内儿童乐园定制_淘气堡订做_蹦床公园订制厂家-乐奇多 | 素时刻 - 为亿万家庭提供健康饮食|